非洲猪瘟给行业造成了巨大的伤害，加快了猪周期的进程与行业的整合，重塑了行业格局。对于养猪人而言，既是最坏的时代也是最好的时代。一方面受到非洲猪瘟的困扰，生物安全的要求不断的提升；另一方面高企的猪价带来了前所未有的景气行情，为广大养猪人提供了巨大的发展机遇。

猪场做了2型猪圆环病毒疫苗免疫却依然有病毒循环？多数猪场免疫程序并不到位

《农财宝典》新牧网 记者 王之娴

猪圆环病毒病作为困扰养猪业最为重要的疾病之一，在高猪价时期对于农场的收益影响变得更为显著。硕腾（中国）在今年8月底推出了猪圆环病毒1-2型嵌合体灭活疫苗“瑞圆安”，成为第3个正式进入中国的进口猪圆环病毒疫苗。那么“瑞圆安”有怎样的优势和特点，又将如何帮助用户拥抱高收益呢？

10月11日，华南农业大学宋长绪研究员、硕腾猪事业部技术负责人王科文博士和硕腾猪事业部高级产品经理吴华做客《农财大视野》，为养殖户直播讲解非洲猪瘟时代2型猪圆环病毒病的防控和免疫程序优化思路。

日常免疫2型猪圆环病毒疫苗，可能并不完全懂猪圆环病毒病

华南农业大学宋长绪研究员

宋长绪研究员首先为大家做猪圆环病毒病流行现状及免疫控制的主题报告。2型猪圆环病毒在动物界存在非常广泛，是一种单股负链DNA病毒，无囊膜，直径只有17到20个nm，是已知脊椎动物病毒中最小的一种病毒。该病毒由一个简单的环状的DNA加上衣壳蛋白组成，只有两个主要的蛋白——Cap蛋白（制作疫苗和监测抗体的靶蛋白）和Rep蛋白（复制酶，驱动复制）。圆环病毒对外界环境的抵抗力非常强。

1974年首次发现PCV1，是PK-15细胞的常见污染物，到了1991年，发现了PMWS与PCV2有关联，猪圆环病毒的重要性被重新认识。PCV1和PCV2都主要包含ORF1、ORF2两个阅读框。ORF1编码与病毒复制相关的Rep蛋白，ORF2编码病毒的衣壳蛋白（具有良好的免疫原性）。2017年，在美国首次发现了PCV3。这3种型的猪圆环病毒之间差别较大，其中PCV2和PCV3与猪病有较多关系，但PVC3的研究还不够清楚。猪圆环病毒具有非常多的多样性。

细分聚焦到2型圆环病毒，有2a、2b、2c、2d和2e五个亚基因型。目前主要流行的是2a、2b亚型，而最近的研究中又证明2d和2e亚型也逐渐多起来了。

目前的研究表明猪圆环病毒可以通过口鼻、扁桃体、支气管、眼分泌物、粪便、唾液、尿液以及乳汁来传播，传播途径非常广泛。而且猪圆环病毒2型可以通过猪精液传播，以及通过母猪胎盘传播给仔猪。但是通过胎盘传播是在感染比较压力比较大的极端情况下，在感染压力小的情况下一般不会通过胎盘传播。

宋长绪指出，本次非洲猪瘟期间大家非常关注血浆蛋白粉传播非洲猪瘟的情况，实际上已经证实血浆蛋白粉可传播猪圆环病毒，并且起到重要作用。传播途径研究对防控猪圆环病毒病是非常有帮助的。

我国猪圆环病毒病在2000年以后流行的主要是2b亚型毒株，随后是2d，以及2e也都有出现。猪圆环病毒在猪群中流行广泛，实验室检测华南地区猪场抗体阳性率可达百分之百。猪圆环病毒的疫苗普及之后，该病的发生阶段会出现一些变化。从对11个规模猪场1型和2型猪圆环病毒进行调查可以看到，1型猪圆环病毒比例也有4.21%，2型猪圆环病毒的比例是30.61%。在2004、2005年的时候，1型猪圆环病毒的阳性率在11%-12%左右。可见1型猪圆环病毒感染是逐年降低的，原因推测可能与2型猪圆环病毒疫苗的使用有关。因为1型猪圆环病毒和2型猪圆环病毒存在一定交叉保护，2型猪圆环病毒疫苗的使用对1型猪圆环病毒的清除有作用。

因为广泛使用疫苗，目前看起来带毒情况在后备母猪和母猪中会较少，但到产房小猪中会较多，然后到生长育肥猪又多起来，说明免疫策略和免疫程序还有待改进。

在病毒的临床的表现和解剖特点上，大家关心最多的问题是仔猪断奶后多系统衰竭综合征，而宋长绪还指出更多繁殖方面的问题，比如母猪配种、发情不正常、子宫化脓等情况出现非常严重。通常人们不会察觉背后隐藏的原因是2型猪圆环病毒的感染，后来通过免疫2型猪圆环病毒疫苗，发现这些问题都能得到解决。同时也观察到早期一些猪圆环病毒感染严重的猪场，健仔数只有六七头，免疫疫苗三个月到半年之后产仔数可以提高的10头甚至更高。

另外保育猪和生长肥育猪的顽固性的拉稀，以及生长育肥猪感染圆环病毒之后猪群不整齐，出现呼吸道的问题，影响生长速度等，通过免疫2型猪圆环病毒疫苗之后能够明显得到改善。

在疫苗出来以前，人们对猪圆环病毒病的防控是非常无措的，现在有疫苗可以用，所以变得简单了。那么有了疫苗之后该如何正确使用？宋长绪认为总体来讲，母猪小猪都免疫是非常经济且必要的。假如母猪免疫得好，小猪可以晚点免疫，如果母猪没有免疫，那么小猪免疫越早越好。另外，免疫程序一定要进行详细的研究，考虑把实验室诊断技术和生产成绩两方面结合起来。

那么猪圆环病毒疫苗的使用效果怎么评价？宋长绪建议可以从以下几个方面来评价：首先是生产成绩，然后是抗体水平整齐度，以及血液和淋巴结病毒载量的下降。

嵌合圆环苗“瑞圆安”，可预防PCV2病毒血症

硕腾猪事业部技术负责人王科文

硕腾猪事业部技术负责人王科文介绍了“瑞圆安”的特点和猪圆环病毒疫苗的免疫策略。

硕腾最近在国内上市的“瑞圆安”，是一款嵌合体疫苗。王科文介绍，PCV1和PCV2病毒结构非常相似，都是环状DNA外包裹一层衣壳。环状DNA主要由2个基因——ORF1和ORF2组成。ORF1主要表达复制相关蛋白，ORF2主要表达衣壳蛋白。而“瑞圆安”PCV1-2的嵌合体ORF1来自于PCV1病毒，ORF2来自PCV2。所以外面的衣壳是PCV2，复制酶则来自于PCV1。因为具有与PCV2外形一样的完整的衣壳，免疫系统识别的时候与PCV2也是一样的，免疫原性好。而嵌合体病毒复制能力来自于PCV1的，生长复制更稳定。另外，嵌合体病毒在猪源细胞上培养，无异源蛋白。

“瑞圆安”采用SLCD+SP油的水包油双佐剂，相互协同。SLCD主要作用是刺激机体尽快产生免疫反应，而SP油主要增加抗原表面积，促进抗原递呈，有利于免疫细胞捕捉吞噬然后处理，延长抗原处理的时间。双佐剂协同作用，使得免疫反应更快，有更强的细胞免疫和体液免疫，保护的时间更长。

关于免疫效果，王科文分享了2个公开发表的攻毒实验研究。第一个实验使用PCV2双阴性猪。3周龄仔猪，第一组对照，二、三组免疫“瑞圆安”。免疫后3周攻毒，9周龄剖杀。

结果显示：免疫14天后ELISA抗体转阳，对照组只在攻毒以后出现抗体的变化，且抗体值差异显著。攻毒后对照组，免疫组化和淋巴受损程度很高，免疫疫苗组，受损程度低。从病毒血症来看，对照组攻毒后10天100%的猪出现病毒血症，而免疫组在整个试验期则有85-95%的猪只未出现病毒血症。进一步使用荧光定量PCR看病毒血症出现猪的病毒血症程度，免疫组比对照组病毒滴度减少1000-10000倍。在美国上市的“瑞圆安”圆环病毒疫苗，标签标明其可预防出现PCV2病毒血症。

第二个试验是瑞圆安免疫后的猪蓝耳病病毒和2型猪圆环病毒双重攻毒试验。使用PCV2b和PRRSV的攻毒剂量都是3ml 105TCID50/ml，攻读途径是滴鼻。3周龄免疫，20周龄双重攻毒，25周龄剖检。全程采血10次（6、9、12、16、20、21、22、23、24、25周龄）、称重次（3、20、25周龄），以及攻毒后每天记录临床评分。结果显示免疫组无临床疾病，而对照组表现中等至严重疾病，双重攻毒临床表现非常明显。免疫组在病毒血症上表现显著减少，在日增重上也显著优于未免疫组。

硕腾猪事业部高级产品经理 吴华

解决效果不理想，猪圆环病毒疫苗免疫程序“三步走”

然而目前尽管广泛免疫了疫苗，2型猪圆环病毒在田间的流行情况依然不容乐观。硕腾实验室通过血清学（硕腾ELISA试剂盒）结合qPCR的调查，发现绝大部分的猪场还是存在着很明显的2型猪圆环病毒的循环。80%在生长育肥猪阶段循环，10%在产房里存在病毒循环；另外10%在保育猪群有循环。荧光定量PCR检测结果显示，有的猪场生长猪阶段PCV2的拷贝数还挺高。

那么这是为什么？是疫苗质量的问题，还是说免疫程序的问题？如果是免疫程序的问题，应该怎样去优化？

王科文谈到如何去解决圆环病毒疫苗临床免疫效果不理想的情况。一方面是选择信得过的质量优异的疫苗，另外一方面呢，就是要有一个合理的免疫程序。在目前感染情况下，如何优化PCV2的免疫程序，简单来讲可分三步走：

第一步，要想办法去减少母源抗体带来的干扰。研究显示，母源IPMA抗体小于8log2时，免疫后不受母源抗体感染，但IPMA抗体小于5.5log2时则易感。

但IPMA抗体方法在国内应用较少，可基于硕腾Synbiotic试剂盒的IPMA和ELISA抗体值相关性研究，选择在ELISA抗体400-650时接种疫苗（仅适用于硕腾的该试剂盒）。

在国内，基于对不同免疫状况的母猪所产的21日龄仔猪进行母源抗体水平进行调查，如果只是考虑减少母猪母源抗体干扰，可粗略推荐生长猪接种时间：

有条件可以采用试剂盒评估目标时间点母源抗体值。

第二步，评估生长猪群PCV2感染循环时间和强度，基于免疫反应的特点，在感染发生3周前完成接种。

第三步，综合母源抗体影响和PCV2循环时间及强度，优化生长猪免疫程序。考虑PCV2循环时间和压力，优化种猪群免疫程序。后备猪配种前完成2次接种。

网友提问环节：

1、 请问在非瘟防控期间，大家的关注重点是非瘟，这时候防控猪圆环病毒有何意义？

宋长绪：最近一年多时间里，非洲猪瘟对我国养猪业的影响非常大。在非洲猪瘟期间整个行业是惊慌失措、无手足无措的状态，在这种情况下我们很多疫苗包括圆环病毒疫苗的免疫都停下来了。但是经过惊慌、和手足无措之后，我们通过提高生物安全级别，逐渐总结出应对措施，对非洲猪瘟防控的信心在逐渐提高。大家下一步考虑的是怎样定点清除，以及后非洲猪瘟时代怎样复产。这时我想圆环病毒病防控的重要性会凸显出来。圆环病毒病是一种免疫抑制病，与很多疾病是相互作用的，通过圆环病毒疫苗的免疫来提高猪群的免疫能力，对于后非洲猪瘟时代复产应该是有正面的作用的。

2、 猪场仔猪免疫了圆环疫苗，但是抗体水平上不来，请问是什么原因，怎么解决？

王科文：首先需要清楚，用的是什么试剂盒？我们现在看来用普通的试剂盒便宜疫苗以后基本上都会起抗体。但如果的确出现了抗体起不来的现象，我认为可能更多的要考虑几个因素：一是疫苗质量的问题；二是免疫程序的问题；三是疫苗保存的问题啊，或者接种技术，等等。实际上猪场免疫效果不理想是普遍存在的。

3、 圆环防控在田间很复杂，因为田间不光存在圆环病毒，还存在蓝耳、伪狂，支原体，以及猪瘟等，能否分享一下关于圆环和其他疾病的相互作用和影响？

宋长绪：很多疾病之间都存在相互作用，但圆环病毒与其他病原之间相互作用更突出。首先，因为它广泛存在，几乎所有猪群都有；其次它是一种免疫抑制病。

圆环病毒与一些细菌病，比如副猪嗜血杆菌和链球菌等相互作用非常强。早年的猪场，副猪嗜血杆菌、喘气病、以及链球菌的感染比例非常高，导致用药的量也非常高。直到我们把圆环病毒病通过疫苗免疫解除后，这些病很多就自然消失了。圆环病毒感染还会影响其他疫苗的免疫效果，比如刚才讲到的对猪瘟免疫的影响。实际上我们猪场处理好蓝耳病和圆环病后，很多其他问题也会自然解决，医疗费用下降非常显著。当然现在还要抓紧非洲猪瘟防控。

除了圆环病毒影响其他疾病，其他疾病的混合感染也会加重圆环病毒的感染，如prrs mh等，都会加重圆环病毒病的症状。

4、 请问我们在田间怎样去评估圆环病毒疫苗的免疫效果？

宋长绪：很多人说圆环病毒疫苗使用不好评估，但是我个人认为圆环苗是许多疫苗中最容易评估、最直观、最立竿见影一个。首先可以从生产指标来评价，如料肉比、日增重、配种、分娩率等，然后是病毒血症，可以比较定量地评估圆环病毒疫苗的免疫效果。

王科文：PCV2疫苗免疫评估大体上分几个方面：第一是减少临床疾病的发生；第二是改善生产性能；第三是实验室通过淋巴结免疫组化来评估，也可评估抗体值。临床上相对来说最多看的是临床疾病的减少，在非洲猪瘟影响下猪场很多会自配荧光定量PCR仪，也可以通过特定定量PCR看病毒血症发生的比例和病毒载量来评估。

5、 请问很多圆环疫苗是基于PCV2a来设计的，但现在流行毒株不仅是2a,还有2b,2d，那么pcv2a与2b,2d有交叉保护作用吗？以及PCV2疫苗对PCV3能产生保护吗？

宋长绪：2018年的国内发现PCV3以来，我们实验室检测发现PCV3目前的流行率还是蛮高的。PCV2型和3型之间Cap蛋白以及整个基因组的同源性只有30%左右。目前PCV3的分离鉴定还比较困难，所以发病模型建立一直是一个难题。因此现在对于2型圆环病毒疫苗对3型到底能不能保护还没有可靠的证据。

但是根据生产情况看，个别场还是有一些跟3型圆环毒有关联的病发生，但是都没有特别准确的定论。不过目前与圆环病毒相关的疾病还是可控的，后续还需要进一步的研究。

圆环病毒基因亚型之间的同源性相对还是比较高的。目前从实验室的数据来看，不管是什么毒株的疫苗，亚型之间交叉保护是没有问题的。从临床上看，不管是2a还是2b毒株，对于目前圆环病毒问题都是基本能解决的。

6、 现在圆环疫苗分为好几类，包括全病毒灭活疫苗，亚单位疫苗，嵌合病毒全病毒疫苗，这三种有什么差异呢？

宋长绪：简单介绍3类疫苗的定义。（全病毒疫苗：培养完整的病毒，灭活+佐剂形成疫苗；亚单位疫苗：通过载体表达Cap蛋白+佐剂形成疫苗；嵌合体疫苗：以PCV1的ORF1和PCV2的ORF2构建病毒DNA，培养方式同全病毒，灭活后+佐剂）

王科文：嵌合体疫苗和全病毒灭活苗都是全病毒疫苗。外观都是有全病毒粒子的疫苗，特点是抗原质量高，纯度高。亚单位基因工程疫苗，表达Cap蛋白，表达量高。

7、猪场免疫圆环病毒疫苗后出现了应激，包括起包、发热等，请问是什么原因？

王科文：疫苗免疫以后多少都会出现一些反应，但是如果反应过大就成了副反应。原因一是因为杂蛋白多；二是有时候为做高病毒量加大了血清使用量；第三就是佐剂，有一些佐剂刺激很强。还有一些比如疫苗被污染。

宋长绪：副作用问题非常复杂，就佐剂而言要想提高免疫效果很可能副作用就会大，所以疫苗企业在生产过程中需要寻求一个平衡点。还有一些类型的疫苗在类毒素上可能会超标，还有包括热源问题，水质问题等等。另外，出现应激也不能完全从疫苗上找原因，猪群状态的影响也非常大。

直播室合影留念

“农财大视野”硕腾专场

本期嘉宾：宋长绪，王科文，吴华

栏目指导：彭进，吴昊晖

本期统筹：刘锋，钟展锋

技术统筹：杨鹏，陈博

文字报道：王之娴

设计：吕敏怡

编辑：龙振辉